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La nueva prueba es más barata, más fácil, y puede diagnosticar seguro la infección SARS-CoV-2

La nueva prueba de flujo lateral vigilante es más barata, más fácil utilizar y tan seguro como la prueba actual de la polimerización en cadena del patrón oro para diagnosticar la infección SARS-CoV-2.

Un SARS-CoV-2 que la prueba de flujo lateral que combina dos enzimas bacterianas con series genéticas y un par de antenas es más barata y más fácil utilizar que la polimerización en cadena prueba mientras que produce resultados comparable seguros. Vigilant llamado y diseñado en KAUST, la prueba puede descubrir mismo pequeñas cantidades de ARN viral en una muestra.

Varios tipos de pruebas de flujo laterales están actualmente disponibles o bajo investigación para descubrir SARS-CoV-2. Dependiendo de cómo trabajan, todos tienen desventajas, incluyendo descubrir el virus solamente varios días después de la infección o producir resultados del positivo falso y del falso negativo.”

Estañe Marsic, dice a Ph.D. Student, KAUST

Las pruebas de la polimerización en cadena, que conducto en laboratorios, resultados más seguros de la producción pero son costosas y requieren el equipo sofisticado y personales expertos.

“Vigilante puede conducto en fijaciones nonlaboratory y es importante más barato y más fácil utilizar que las pruebas de la polimerización en cadena,” dice Marsic.

El primer paso crítico de la plataforma vigilante implica una técnica llamada la amplificación reversa de la polimerasa de la transcripción-recombinase (RT-RPA) para hacer muchas copias de una región específica en el genoma SARS-CoV-2, si existe en la muestra del lampazo de la nariz y del paso de una persona. Las pruebas de la polimerización en cadena también amplifican series virales del gen en muestras pero las implican el pasar de las muestras durante ciclos múltiples de la temperatura del cielo y tierra. RT-RPA puede ser temperatura ambiente del doneat con un equipo mucho más barato y fácil de usar.

Cualquier gen amplificado SARS-CoV-2 en el producto de este proceso se marca con etiqueta con una molécula llamada biotina, después adicional a un tubo de ensayo que contiene el complejo especialmente diseñado de la detección de KAUST.

Este complejo se forma de dos enzimas. En un extremo, una enzima bacteriana llamada Cas9 se conjuga con una guía del ARN que reconozca y sujete solamente a la serie correspondiente del gen SARS-CoV-2. En el otro extremo, otra enzima bacteriana llamada VirD2 se sujeta a una serie de nucleótido fluorescente-marcada con etiqueta.

Las caídas de la reacción entre el complejo y el producto de RT-RPA entonces se agregan a una tira de prueba lateral de flujo impregnada con una proteína de biotina-reconocimiento llamada streptavidin en un extremo y un anticuerpo de antena-reconocimiento fluorescente en el otro. Si la muestra contiene series del gen SARS-CoV-2, habrán limitado al complejo VirD2-Cas9. Un resultado positivo ocurre cuando aparecen dos líneas visibles. La primera línea es donde la biotina en el amplicon SARS-CoV-2 ata al streptavidin. Está donde la segunda línea la etiqueta fluorescente en el otro extremo de los attaches del complejo al anticuerpo de la tira. Un resultado negativo muestra solamente como única línea causada por la etiqueta fluorescente que ata al anticuerpo.

“Ahora estamos trabajando en la fabricación de nuestra plataforma vigilante más convivial acoplándola con una técnica incluso más simple de la amplificación,” dice al bioengineer Magdy Mahfouz de KAUST, que llevó la investigación. “También estamos trabajando en producir otras pruebas diagnósticas eficientes y rápidas que puedan descubrir los ácidos nucléicos para habilitar la prueba del punto-de-cuidado para los patógeno, incluyendo virus y marcadores de la enfermedad.”

Source:
Journal reference:

Marsic, T., et al. (2021) Vigilant: An engineered VirD2-Cas9 complex for lateral flow assay-based detection of SARS-CoV-2. Nano Letters. doi.org/10.1021/acs.nanolett.1c00612.