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Os pesquisadores desenvolvem o método novo para ràpida detectar o RNA SARS-CoV-2

os DTU-pesquisadores desenvolvem um método novo para ràpida detectar o RNA SARS-CoV-2 que pode igualmente ser projectado detectar outras doenças.

Os métodos de detecção actuais do RNA SARS-CoV-2 recomendados pela Organização Mundial de Saúde confiam profunda nos papéis de enzimas biológicas. O custo alto, as condições estritas do transporte e de armazenamento, e as faltas globais da fonte do limite das enzimas grande-escalaram o teste. Isto significa que a maioria de países têm que dar a prioridade ao teste em casos vulneráveis, que atrasa diagnósticos e identificação de casos positivos, que outra vez pode impedir da mitigação e da supressão pandémicas.

A reacção em cadeia reversa quantitativa da transcrição-polimerase (qRT-PCR) é ainda a bandeira de ouro para a detecção do inteiro-genoma e jogou um papel crucial em controlar a pandemia Covid-19. Contudo, o amostra-à-resultado toma diversas horas. O método necessita um instrumento complexo do thermocycler para levantar e abaixar a temperatura da reacção em etapas discretas.

Mais simples e menos caro

os métodos isothermal Não-enzimáticos da amplificação, sendo mais directos e mais rápidos, mostraram potenciais prometedores substituir o qRT-PCR. Embora estes métodos executem muito bem quando o gene do alvo é curto, têm para funcionar ainda eficientemente para detectar genomas inteiros (alvos longos do ADN ou do RNA).

Durante a pandemia COVID-19, a euro- área sozinha experimentou uma gota 3,8% no GDP dentro do primeiro trimestre de 2020 (Eurostat 2020). Assim, desenvolver uma metodologia mais barata para a detecção do micróbio patogénico seria altamente benéfico para pacientes e os sistemas de saúde que apontam lutar as pandemias futuras.

O professor adjunto Yi Sun e Postdoc Mohsen Mohammadniaei na tecnologia da saúde de DTU inventou um ensaio do um-potenciômetro, que nomeasse NISDA (deslocamento isothermal Não-enzimático da costa e ensaio da amplificação). O ensaio é para a detecção rápida do RNA SARS-CoV-2 sem a necessidade para a etapa da transcrição do reverso do RNA da metodologia qRT-PCR. Permite uma rotina de uma etapa da detecção. As necessidades do usuário somente de adicionar a amostra em uma única câmara de ar, colocam-na no instrumento e esperam-nas 30 minutos para obter o resultado.

Os assayworks em uma temperatura constante não exigem nenhuma enzima, e são baseados na aproximação suporte-negociada do deslocamento (TMSD) da costa. TMSD é uma ferramenta molecular enzima-livre de qual a costa de ADN ou de RNA (saída) é deslocada por uma outra costa (entrada) para formar uma estrutura frente e verso mais estável.

Precisão alta e sensibilidade

O ensaio de NISDA detectou uma concentração muito baixa do RNA (10 copies/µL) em somente 30 minutos. Em colaboração com o hospital de Hvidovre e o hospital de Bispebjerg, a equipa de investigação poderia clìnica validar o ensaio de NISDA, representando a especificidade de 100% e a sensibilidade 96,77% e 100% ao estabelecer-se no laboratório e no hospital, respectivamente.

Nós exploramos a aproximação de TMSD e projetamoss três pontas de prova do ADN. Uma ponta de prova trocou o genoma inteiro a uma costa curto do ADN. Outras duas pontas de prova utilizaram o ADN curto trocado para provocar uma reacção da cascata da amplificação do sinal da fluorescência. A beleza do ensaio de NISDA é sua simplicidade. Nós removemos o uso das enzimas para reduzir o ensaio custado e para aumentar seu vigor na temperatura ambiente.”

Yi Sun, professor adjunto

O RNA extraído das amostras do cotonete da garganta é adicionado à mistura de reacção e incubado no °C 42 por 30 minutos nos trabalhos do ensaio. O passo seguinte é medida da fluorescência, e as amostras com fluorescência significativamente mais alta sinalizam do que as amostras de controle (negativas) são consideradas positivas.

Para uma ferramenta de diagnósticos da doença do múltiplo

“Directamente de envolvimento em melhorar a saúde do pessoa é o sonho final de um pesquisador biomedicável. Nós acreditamos que o ensaio de NISDA nos deu esta possibilidade maravilhosa alcançar essa ambição,” o pesquisador pos-doctoral Mohsen que Mohammadniaei diz.

“O passo seguinte é projectar mais o ensaio de NISDA para detectar os micróbios patogénicos diferentes e desenvolver um dispositivo diagnóstico do ponto--cuidado para diagnósticos múltiplos da doença. Uma outra vantagem do ensaio de NISDA é sua capacidade para ser para breve alvos projetados do RNA tais como o microRNA do biomarker do cancro. Nós estamos explorando actualmente esquemas diferentes para a comercialização do ensaio de NISDA. Nós estamos certos que o ensaio de NISDA se tornará de conhecimento geral logo”, professor adjunto que Yi Sun termina.

Source:
Journal reference:

Mohammadniaei, M., et al. (2021) A non-enzymatic, isothermal strand displacement and amplification assay for rapid detection of SARS-CoV-2 RNA. Nature Communications. doi.org/10.1038/s41467-021-25387-9.