Avertissement : Cette page est une traduction automatique de cette page à l'origine en anglais. Veuillez noter puisque les traductions sont générées par des machines, pas tous les traduction sera parfaite. Ce site Web et ses pages Web sont destinés à être lus en anglais. Toute traduction de ce site et de ses pages Web peut être imprécis et inexacte, en tout ou en partie. Cette traduction est fournie dans une pratique.

Les scientifiques développent une analyse sans cellule pour examiner des inhibiteurs de l'entrée SARS-CoV-2

Dans une étude entreprise à l'Institut de Technologie de l'Israël (Technion), l'Israël, scientifiques ont développé et ont validé une analyse sans cellule de fluorescence pour l'examen critique rapide des inhibiteurs de protéine. Ils se sont principalement concentrés sur les inhibiteurs de candidat qui bloquent l'interaction entre le domaine récepteur-grippant de pointe (RBD) du coronavirus 2 (SARS-CoV-2) de syndrôme respiratoire aigu sévère et l'enzyme de conversion de l'angiotensine humaine 2 (hACE2).

Étude : Une analyse sans cellule pour lÉtude : Une analyse sans cellule pour l'examen critique rapide des inhibiteurs de hACE2-receptor - grippement de SARS-CoV-2-Spike. Crédit d'image : Dana.S/Shutterstock

Une version de prétirage de l'étude est procurable sur le serveur de bioRxiv* tandis que l'article subit l'inspection professionnelle.

Mouvement propre

SARS-CoV-2, l'agent pathogène causal de la maladie 2019 (COVID-19) de coronavirus, est enveloppé, monocatenaire, virus ARN de positif-sens cet principalement des cellules épithéliales des crises ACE2-expressing des voies respiratoires humaines. L'entrée virale de cellule hôte est assistée par l'interaction entre le récepteur ACE2 de membrane de cellule hôte et la pointe virale RBD, suivie de la fusion de l'enveloppe virale avec la membrane de cellule hôte. Ainsi, les inhibiteurs de petite molécule qui bloquent cette interaction peuvent servir d'agents thérapeutiques potentiels pour éviter l'infection SARS-CoV-2.

Dans l'étude actuelle, les scientifiques ont développé une analyse sans cellule de fluorescence qui peut être employée pour examiner des inhibiteurs de candidat d'ACE2 - interaction de RBD.

L'analyse

L'analyse comprend les particules fluorescentes RBD-enduites de polystyrène qui captent hACE2 fluorescent marqué faute d'inhibiteur. Une fois incubée avec un inhibiteur, aucune interaction ne se produit entre RBD et ACE2. Ceci a comme conséquence la réduction de signes fluorescents qui peuvent être trouvés utilisant la cytométrie de flux ou la microscopie à fluorescence. Les scientifiques ont en covalence enduit les particules fluorescentes de RBD pour produire des particules comme un virion.

Validation d'analyse

Les scientifiques ont entrepris des expériences in vitro pour valider la spécificité des particules RBD-enduites (particules de virion) grippant à hACE2. Les découvertes ont indiqué que les particules comme un virion grippent particulièrement à hACE2 et pas à la balise fluorescente (mCherry) utilisée dans l'étude.

Les expériences qu'elles ont conduit pour déterminer la sensibilité de l'analyse et la durée a indiqué que les particules comme un virion ont la sensibilité élevée même pour un peu de hACE2. Cependant, une concentration plus élevée de hACE2 a fourni plus de sensibilité pour les particules comme un virion. D'ailleurs, ils ont estimé que le temps de réaction optimal pour RBD - le grippement ACE2 est de 45 mn.    

Le signe fluorescent qu'elles ont obtenu en analyse était un signal numérique bimodal ou. Il n'y avait aucune commande des vitesses analogique des particules comme un virion de la non-fluorescence aux valeurs de plein-fluorescence. Ceci indique le grippement coopératif entre les particules comme un virion et le hACE2. Comme proposé par les scientifiques, ce cooperativity pourrait être à cause des modifications conformationnelles hACE2 en approche qui entraînent une interaction plus intense avec d'autres molécules hACE2.    

Ils ont validé la fonctionnalité de l'analyse en conduisant la réaction obligatoire en la présence et l'absence d'un anti-RBD peptide synthétique. Les découvertes ont révélé une diminution dépendante de la dose continue de RBD - hACE2 grippant en présence de l'inhibiteur synthétique. Ceci indique que l'analyse peut être employée pour analyser RBD - l'inhibition hACE2 quantitatif.

Interaction entre les particules virales et l'ARN - granules de protéine

Dans un ensemble d'expériences indépendant, les scientifiques ont exploré l'affinité obligatoire des particules comme un virion pour l'ARN synthétique - les granules de protéine qui sont attendues pour réduire la quantité de particules virales actives. La pièce d'ARN des granules s'est composée de long ARN synthétique de non-codage, et la pièce de protéine s'est composée de hACE2. Ces granules ont été produites in vitro par en kit.   

Mécaniste, le long ARN de non-codage contient les accepteurs multiples pour hACE2 et ainsi, augmente la concentration locale de hACE2. Ceci, consécutivement, facilite l'occlusion des particules virales, mettant en valeur le potentiel de l'ARN - granules de protéine en tant qu'agents anti-SARS-CoV-2 thérapeutiques.

Les découvertes d'analyse ont indiqué que les particules comme un virion grippent à l'ARN de hACE2-coated des granules avec la sélectivité et la spécificité élevées. Ceci qui trouve confirme l'activité anti-SARS-CoV-2 de l'ARN - granules de protéine.

Signification d'étude

L'analyse sans cellule de fluorescence développée dans l'étude peut être employée examiner à rapidement et de manière rentable des inhibiteurs de l'entrée SARS-CoV-2 sans exiger des installations élevées de laboratoire de niveau de sécurité biologique. L'application d'analyse a pu être étendue pour évaluer les interactions entre les mutants de RBD et le hACE2 ou d'autres récepteurs de cellule hôte.

avis *Important

le bioRxiv publie les états scientifiques préliminaires qui pair-ne sont pas observés et ne devraient pas, en conséquence, être considérés comme concluants, guident la pratique clinique/comportement relatif à la santé, ou traité en tant qu'information déterminée.

Journal reference:
Dr. Sanchari Sinha Dutta

Written by

Dr. Sanchari Sinha Dutta

Dr. Sanchari Sinha Dutta is a science communicator who believes in spreading the power of science in every corner of the world. She has a Bachelor of Science (B.Sc.) degree and a Master's of Science (M.Sc.) in biology and human physiology. Following her Master's degree, Sanchari went on to study a Ph.D. in human physiology. She has authored more than 10 original research articles, all of which have been published in world renowned international journals.

Citations

Please use one of the following formats to cite this article in your essay, paper or report:

  • APA

    Dutta, Sanchari Sinha. (2021, October 07). Les scientifiques développent une analyse sans cellule pour examiner des inhibiteurs de l'entrée SARS-CoV-2. News-Medical. Retrieved on December 07, 2021 from https://www.news-medical.net/news/20211007/Scientists-develop-a-cell-free-assay-to-screen-SARS-CoV-2-entry-inhibitors.aspx.

  • MLA

    Dutta, Sanchari Sinha. "Les scientifiques développent une analyse sans cellule pour examiner des inhibiteurs de l'entrée SARS-CoV-2". News-Medical. 07 December 2021. <https://www.news-medical.net/news/20211007/Scientists-develop-a-cell-free-assay-to-screen-SARS-CoV-2-entry-inhibitors.aspx>.

  • Chicago

    Dutta, Sanchari Sinha. "Les scientifiques développent une analyse sans cellule pour examiner des inhibiteurs de l'entrée SARS-CoV-2". News-Medical. https://www.news-medical.net/news/20211007/Scientists-develop-a-cell-free-assay-to-screen-SARS-CoV-2-entry-inhibitors.aspx. (accessed December 07, 2021).

  • Harvard

    Dutta, Sanchari Sinha. 2021. Les scientifiques développent une analyse sans cellule pour examiner des inhibiteurs de l'entrée SARS-CoV-2. News-Medical, viewed 07 December 2021, https://www.news-medical.net/news/20211007/Scientists-develop-a-cell-free-assay-to-screen-SARS-CoV-2-entry-inhibitors.aspx.