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plate-forme satisfaite élevée basée sur microscopie pour l'examen critique SARS-CoV-2 sérologique

La connaissance précise des cas actuels et précédents de la maladie 19 de coronavirus (COVID-19) est essentielle pour contrôler la propagation rapide du coronavirus 2 (SARS-CoV-2) de syndrôme respiratoire aigu sévère.

Les analyses sérologiques peuvent aider à recenser des personnes précédemment exposées au virus qui peut potentiellement être immunisé. De plus, les plates-formes sérologiques cellulaires d'examen critique peuvent faciliter le recensement des anticorps qui peuvent être indétectables par d'autres méthodes déployées pour étudier l'antigénicité du protéome SARS-CoV-2.

Une étude neuve publiée sur le serveur de prétirage de medRxiv* a employé la microscopie satisfaite élevée robotisée d'immunofluorescence (AHCIM) pour évaluer la viabilité d'une telle approche pour trouver des réactions immunitaires humorales contre les protéines SARS-CoV-2.

Motivation

L'objectif de ligne zéro de cette étude était de comprendre l'utilité des plates-formes sérologiques basées sur immunofluorescence d'examen critique pour recenser le nucleocapsid (n) et les anticorps de la pointe (s) dans les personnes infectées SARS-CoV-2.

La méthode appliquée est très utilisée par les laboratoires innombrables mondiaux pour beaucoup de buts. Par conséquent, les scientifiques ont présumé que cette méthode pourrait être employée pour différents buts liés à la sérologie SARS-CoV-2 si de la sensibilité et de la spécificité acceptables.

L'étude

Jusqu'à présent, aucune étude utilisant un système basé sur microscopie d'immunofluorescence élevée de débit n'a complètement examiné des réactions des anticorps dans des échantillons de sérum humain contre les protéines SARS-CoV-2.

Les scientifiques ont constaté que la microscopie satisfaite élevée robotisée d'immunofluorescence (AHCIM) était efficace en examinant rapidement des sérums pour des anticorps contre les protéines de SARS-CoV-2 N, de S, et de M (membrane).

Suivre une méthode semi-quantitative, ils ont produit des rapports d'IgG de moyennes valeurs d'intensité de fluorescence selon la cellule de non-transfecté et de transfecté. Les rapports élevés d'IgG ont indiqué des réactions des anticorps intenses. Par la suite, les rapports ont été employés pour évaluer la sensibilité et la spécificité d'AHCIM pour trouver N et S IgG. On l'a observé que les résultats étaient équivalents à ceux vus pour des absorbances mesurées par ELISA.

Diminuer le nombre de cellules de transfecté améliore 488 rapports d
Diminuer le nombre de cellules de transfecté améliore 488 rapports d'intensité. (a) Images représentatives des cellules de transfecté de nucleocapsid de StrepTagged SARS-CoV-2 imagées à différents rapports de transfecté aux cellules de non-transfecté. Des échantillons de sérum avec (C08) SARS-CoV-2 des réactions intenses (A09), intermédiaires (C01) et faibles du nucleocapsid IgG ont été sélectés. Des cellules de transfecté plaquées au confluency 100% ont été divisées aux dilutions indiquées, fixées, incubées avec les sérums patients et traitées pour l'immunofluorescence comme décrit. (b) Quantification robotisée de 488 rapports d'intensité pour COVID19 les échantillons de sérum A09, C01 et C08 et COVID19 l'échantillon de sérum négatif D06. La densité décroissante de cellules augmente le rapport d'IgG pour les échantillons intenses, intermédiaires et faibles du positif COVID-19.

Les scientifiques ont noté que les méthodes basées sur ELISA exigent l'accès aux protéines épurées, et au cas où ce ne seraient pas procurables, AHCIM peut être une alternative meilleur marché et plus rapide pour trouver des anticorps de SARS-CoV-2 N et de S.

Évaluation qualitative de débit inférieur rapporté précédent d'études principalement des titres d'anticorps. L'étude actuelle présente un débit rapide et élevé, et une méthode semi-quantitative et est, pour cette raison, une mise à jour au-dessus des méthodes de dépistage sérologiques précédentes.

Une fois que le système des protéines de N trouvant et de S était validé, les chercheurs ont progressé en circuit aux réactions des anticorps vérifiantes à la protéine de SARS-CoV-2 M.

Les études précédentes avaient recensé des réactions des anticorps détectables contre la protéine de Radars à ouverture synthétique-CoV M, qui a servi de motivation à cette étude.

Les chercheurs ont observé que 84,7% d'échantillons de COVID essayés ont eu l'IgG détectable contre le M. Ces résultats ont été corroborés par une autre étude récente qui a également trouvé une forte prévalence des anticorps de M en sérums COVID-19 patients positifs, utilisant la cytométrie de flux.

Comparé à d'autres études, un numéro élevé des patients COVID-19 avec des anticorps à M ont été trouvés dans cette étude. Ceci pourrait être piloté par la condition dans laquelle on analyse des protéines virales pour la réactivité avec les sérums patients. Généralement, on a observé une séroprévalence élevée des anticorps de M dans les patients COVID-19. Par conséquent, examiner d'anticorps de M peut être valeur au contrôle SARS-CoV-2 sérologique.

Plusieurs complications dans le contrôle d'anticorps résultent de l'utilisation répandue de la protéine de S comme immunogène utilisé dans les vaccins. Ceci souligne l'installation de la protéine de M.

Précédemment, les vaccinations combinant S et N comme immunogènes ont également été proposées, comme qui réduiraient le besoin des tests de N et de S d'anticorps. Ce d'autres points culminants le rôle potentiel significatif de M comme borne sérologique.

Pour prouver ceci, les scientifiques ont recensé des cas classifiés en tant que négatif COVID-19 (dû au manque d'anticorps détectables de N) mais ont été reclassifiés en tant que positif par l'examen critique pour des anticorps de M par AHCIM.

Ils étaient d'avis que cela compléter l'ELISA avec AHCIM pourrait améliorer la sensibilité et la spécificité du contrôle SARS-CoV2 sérologique. En outre, les bornes sérologiques longévitales activent le serosurveillance COVID-19 optimal. L'analyse préliminaire des rapports de N et de M IgG (tracés contre le test d'ACP de goujon de jours) a montré une tendance se baissante dans N au fil du temps, mais pas pour le M.

Future recherche

Tandis que les résultats préliminaires sont d'une manière encourageante, plus de recherche des titres sur de N et de M anticorps est exigée pour déterminer M comme borne sérologique longévitale comparée au N.

D'autres questions importantes sont liées aux corrélations entre la présence des anticorps de M et les résultats de la maladie et si les anticorps contre M soutiennent l'activité de neutralisation des réactions immunitaires humorales produites contre SARS-CoV-2.

Aborder ces questions de recherches pourrait faciliter immensément la mise au point et le guide de vaccin que des antigènes pourraient être employé comme bornes de l'infection antérieure dans des méthodes diagnostiques.

Avis *Important

le medRxiv publie les états scientifiques préliminaires qui pair-ne sont pas observés et ne devraient pas, en conséquence, être considérés comme concluants, guident la pratique clinique/comportement relatif à la santé, ou traité en tant qu'information déterminée.

Journal reference:
Dr. Priyom Bose

Written by

Dr. Priyom Bose

Priyom holds a Ph.D. in Plant Biology and Biotechnology from the University of Madras, India. She is an active researcher and an experienced science writer. Priyom has also co-authored several original research articles that have been published in reputed peer-reviewed journals. She is also an avid reader and an amateur photographer.

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