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plataforma satisfeita alta Microscopia-baseada para a selecção SARS-CoV-2 serological

O conhecimento exacto de casos actuais e precedentes da doença 19 do coronavirus (COVID-19) é essencial controlar a propagação rápida do coronavirus 2 da Síndrome Respiratória Aguda Grave (SARS-CoV-2).

Os ensaios Serological podem ajudar a identificar os indivíduos expor previamente ao vírus que pode potencial ser imune. Além, as plataformas serological baseados em celulas da selecção podem ajudar em identificar os anticorpos que podem ser indetectáveis por outros métodos distribuídos para estudar a antigenitura do proteome SARS-CoV-2.

Um estudo novo publicado no server da pré-impressão do medRxiv* usado automatizou a microscopia satisfeita alta da imunofluorescência (AHCIM) para avaliar a viabilidade de tal aproximação para detectar respostas imunes humoral contra as proteínas SARS-CoV-2.

Motivação

O alvo da linha de base deste estudo era compreender a utilidade de plataformas serological imunofluorescência-baseadas da selecção para identificar o nucleocapsid (N) e anticorpos do ponto (s) em indivíduos contaminados SARS-CoV-2.

O método aplicado é amplamente utilizado por laboratórios incontáveis no mundo inteiro para muitas finalidades. Conseqüentemente, os cientistas supor que este método poderia ser usado para as várias finalidades relativas ao serology SARS-CoV-2 se da sensibilidade e da especificidade aceitáveis.

O estudo

Até agora, nenhum estudo que usa um sistema microscopia-baseado da produção imunofluorescência alta examinou completamente respostas do anticorpo em amostras humanas do soro contra as proteínas SARS-CoV-2.

Os cientistas encontraram que a microscopia satisfeita alta automatizada da imunofluorescência (AHCIM) era eficiente rapidamente em selecionar soros para anticorpos contra as proteínas de SARS-CoV-2 N, de S, e de M (membrana).

Usando um método semiquantitativo, geraram relações de IgG dos valores médios da intensidade da fluorescência pela pilha non-transfected e transfected. As relações altas de IgG indicaram respostas fortes do anticorpo. Subseqüentemente, as relações foram usadas para avaliar a sensibilidade e a especificidade de AHCIM para detectar N e S IgG. Observou-se que os resultados eram equivalentes àqueles considerados para as absorvências medidas por ELISA.

Diminuir o número de pilhas transfected melhora 488 relações da intensidade. (a) As imagens representativas do nucleocapsid de StrepTagged SARS-CoV-2 transfected pilhas imaged em relações diferentes do transfected às pilhas non-transfected. As amostras do soro com (C08) respostas fortes (A09), intermediárias (C01) e fracas de IgG do nucleocapsid SARS-CoV-2 foram seleccionadas. As pilhas de Transfected chapeadas no confluency 100% eram separação nas diluições indicadas, fixavam, incubado com soros pacientes e processado para a imunofluorescência como descritas. (b) A quantificação automatizada de 488 relações da intensidade para o soro COVID19 prova A09, C01 e C08 e a amostra negativa D06 do soro COVID19. A densidade de pilha de diminuição aumenta a relação de IgG para amostras fortes, intermediárias e fracas do positivo COVID-19.
Diminuir o número de pilhas transfected melhora 488 relações da intensidade. (a) As imagens representativas do nucleocapsid de StrepTagged SARS-CoV-2 transfected pilhas imaged em relações diferentes do transfected às pilhas non-transfected. As amostras do soro com (C08) respostas fortes (A09), intermediárias (C01) e fracas de IgG do nucleocapsid SARS-CoV-2 foram seleccionadas. As pilhas de Transfected chapeadas no confluency 100% eram separação nas diluições indicadas, fixavam, incubado com soros pacientes e processado para a imunofluorescência como descritas. (b) A quantificação automatizada de 488 relações da intensidade para o soro COVID19 prova A09, C01 e C08 e a amostra negativa D06 do soro COVID19. A densidade de pilha de diminuição aumenta a relação de IgG para amostras fortes, intermediárias e fracas do positivo COVID-19.

Os cientistas notaram que os métodos ELISA-baseados exigem o acesso às proteínas refinadas, e caso que estes não estão disponíveis, AHCIM pode ser uma alternativa mais barata e mais rápida detectar anticorpos de SARS-CoV-2 N e de S.

Os estudos precedentes relataram principalmente a baixa produção a avaliação qualitativa de titers do anticorpo. O estudo actual apresenta uma produção rápida, alta, e um método semiquantitativo e é, conseqüentemente, uma elevação sobre métodos de selecção serological precedentes.

Uma vez que o sistema de detecção N e de proteínas de S foi validado, os pesquisadores progrediram sobre às respostas de investigação do anticorpo à proteína de SARS-CoV-2 M.

Os estudos precedentes tinham identificado respostas detectáveis do anticorpo contra a proteína de SARS-CoV M, que serviu como a motivação para este estudo.

Os pesquisadores observaram que 84,7% das amostras de COVID testadas tiveram IgG detectável contra o M. Estes resultados foram corroborados por um outro estudo recente que igualmente encontrasse uma predominância alta de anticorpos de M nos soros COVID-19 pacientes positivos, usando o cytometry de fluxo.

Comparado a outros estudos, um número alto dos pacientes COVID-19 com os anticorpos a M foi detectado neste estudo. Isto poderia ser conduzido pelo estado em que as proteínas virais são analisadas para a reactividade com soros pacientes. Geralmente, um seroprevalence alto de anticorpos de M foi observado nos pacientes COVID-19. Conseqüentemente, o exame dos anticorpos de M pode ser valioso ao teste SARS-CoV-2 serological.

Diversas complicações no teste do anticorpo elevaram do uso difundido da proteína de S como o imunogénio usado nas vacinas. Este relevos o serviço público da proteína de M.

Previamente, as vacinações que combinam S e N como os imunogénio foram propor igualmente, como que reduziriam a necessidade para testes do anticorpo de N e de S. Este destaques mais adicionais o papel potencial significativo de M como um marcador serological.

Para provar este, os cientistas identificaram os casos classificados como o negativo COVID-19 (devido à falta de anticorpos detectáveis de N) mas foram reclassificados como o positivo através da selecção para anticorpos de M por AHCIM.

Opinaram que isso complementar ELISA com AHCIM poderia aumentar a sensibilidade e a especificidade do teste SARS-CoV2 serological. Além disso, os marcadores serological duradouros permitem o serosurveillance COVID-19 óptimo. A análise preliminar das relações de N e de M IgG (traçadas contra o teste do PCR do cargo dos dias) mostrou uma tendência de diminuição em N ao longo do tempo, mas não para o M.

Pesquisa futura

Quando os resultados preliminares forem encorajadores, mais pesquisa sobre titers do anticorpo de N e de M está exigida estabelecer M como um marcador serological duradouro comparado ao N.

Outras perguntas importantes estão relacionadas às correlações entre a presença de anticorpos de M e resultados da doença e se os anticorpos contra M amparam a actividade de neutralização das respostas imunes humoral geradas contra SARS-CoV-2.

Endereçar estas perguntas da pesquisa poderia ajudar imensa na revelação vacinal e no guia que os antígenos poderiam ser usados como marcadores da infecção prévia em métodos diagnósticos.

Observação *Important

o medRxiv publica os relatórios científicos preliminares que par-não são revistos e, não devem conseqüentemente ser considerados como conclusivos, guia a prática clínica/comportamento saúde-relacionado, ou tratado como a informação estabelecida.

Journal reference:
Dr. Priyom Bose

Written by

Dr. Priyom Bose

Priyom holds a Ph.D. in Plant Biology and Biotechnology from the University of Madras, India. She is an active researcher and an experienced science writer. Priyom has also co-authored several original research articles that have been published in reputed peer-reviewed journals. She is also an avid reader and an amateur photographer.

Citations

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