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alta plataforma contenta Microscopia-basada para la investigación serológica SARS-CoV-2

El conocimiento exacto de los casos actuales y anteriores de la enfermedad 19 del coronavirus (COVID-19) es esencial controlar la extensión rápida del coronavirus 2 (SARS-CoV-2) de la neumonía asiática.

Los análisis serológicos pueden ayudar a determinar a los individuos expuestos previamente al virus que puede potencialmente ser inmune. Además, las plataformas serológicas célula-basadas de la investigación pueden ayudar en determinar los anticuerpos que pueden ser imperceptibles por otros métodos desplegados para estudiar la antigenicidad del proteome SARS-CoV-2.

Un nuevo estudio publicado en el servidor de la prueba preliminar del medRxiv* usado automatizó alta microscopia contenta de la inmunofluorescencia (AHCIM) para fijar la viabilidad de tal aproximación para descubrir inmunorespuestas humorales contra las proteínas SARS-CoV-2.

Estímulo

El objetivo de la línea de fondo de este estudio era entender la utilidad de las plataformas serológicas inmunofluorescencia-basadas de la investigación para determinar el nucleocapsid (n) y los anticuerpos del pico (s) en individuos infectados SARS-CoV-2.

El método aplicado es ampliamente utilizado por los laboratorios incontables por todo el mundo para muchos propósitos. Por lo tanto, los científicos presumieron que este método se podría utilizar para los diversos propósitos relacionados con la serología SARS-CoV-2 si de sensibilidad y de especificidad aceptables.

El estudio

Hasta la fecha, ningún estudio usando alta un sistema microscopia-basado de la producción inmunofluorescencia ha examinado a conciencia reacciones del anticuerpo en muestras humanas del suero contra las proteínas SARS-CoV-2.

Los científicos encontraron que la alta microscopia contenta automatizada de la inmunofluorescencia (AHCIM) era eficiente en rápidamente el blindaje de los sueros para los anticuerpos contra las proteínas de SARS-CoV-2 N, de S, y de M (membrana).

Usando un método semiquantitativo, generaron las índices de IgG de valores medios de la intensidad de la fluorescencia por la célula non-transfected y transfected. Las altas índices de IgG indicaron reacciones fuertes del anticuerpo. Posteriormente, las índices fueron utilizadas para fijar la sensibilidad y la especificidad de AHCIM para descubrir N y S IgG. Fue observado que los resultados eran equivalentes a ésos considerados para las absorciones medidas por ELISA.

La disminución del número de células transfected perfecciona 488 índices de la intensidad. (a) Las imágenes representativas del nucleocapsid de StrepTagged SARS-CoV-2 transfected las células reflejadas en diversas índices de transfected a las células non-transfected. Las muestras del suero con (C08) las reacciones fuertes (A09), intermedias (C01) y débiles de IgG del nucleocapsid SARS-CoV-2 fueron seleccionadas. Las células de Transfected chapadas en el confluency 100% estuvieron partidas en las diluciones indicadas, reparadas, incubadas con los sueros pacientes y tramitadas para la inmunofluorescencia según lo descrito. (b) La cuantificación automatizada de 488 índices de la intensidad para el suero COVID19 muestrea A09, C01 y C08 y la muestra negativa D06 del suero COVID19. La densidad de célula de disminución aumenta la índice de IgG para las muestras fuertes, intermedias y débiles del positivo COVID-19.
La disminución del número de células transfected perfecciona 488 índices de la intensidad. (a) Las imágenes representativas del nucleocapsid de StrepTagged SARS-CoV-2 transfected las células reflejadas en diversas índices de transfected a las células non-transfected. Las muestras del suero con (C08) las reacciones fuertes (A09), intermedias (C01) y débiles de IgG del nucleocapsid SARS-CoV-2 fueron seleccionadas. Las células de Transfected chapadas en el confluency 100% estuvieron partidas en las diluciones indicadas, reparadas, incubadas con los sueros pacientes y tramitadas para la inmunofluorescencia según lo descrito. (b) La cuantificación automatizada de 488 índices de la intensidad para el suero COVID19 muestrea A09, C01 y C08 y la muestra negativa D06 del suero COVID19. La densidad de célula de disminución aumenta la índice de IgG para las muestras fuertes, intermedias y débiles del positivo COVID-19.

Los científicos observaron que los métodos ELISA-basados requieren el acceso a las proteínas purificadas, y en caso de que éstos no estén disponibles, AHCIM puede ser una opción más barata y más rápida descubrir los anticuerpos de SARS-CoV-2 N y de S.

Los estudios anteriores principal denunciaron a producción inferior la evaluación cualitativa de los títulos del anticuerpo. El estudio actual presenta una producción rápida, alta, y un método semiquantitativo y es, por lo tanto, una mejora sobre métodos de cribado serológicos anteriores.

Una vez que el sistema de proteínas de N que descubría y de S fue validado, los investigadores progresaron conectado a las reacciones de investigación del anticuerpo a la proteína de SARS-CoV-2 M.

Los estudios anteriores habían determinado reacciones perceptibles del anticuerpo contra la proteína de los SARS-CoV M, que sirvió como el estímulo para este estudio.

Los investigadores observaron que 84,7% de muestras de COVID probadas tenían IgG perceptible contra el M. Estos resultados han sido corroborados por otro estudio reciente que también encontró una alta incidencia de los anticuerpos de M en los sueros pacientes positivos COVID-19, usando cytometry de flujo.

Comparado a otros estudios, un número elevado de los pacientes COVID-19 con los anticuerpos a M fue descubierto en este estudio. Esto se podría impulsar por el estado en el cual las proteínas virales se ensayan para la reactividad con los sueros pacientes. Generalmente, un alto seroprevalence de los anticuerpos de M se ha observado en los pacientes COVID-19. Por lo tanto, el blindaje de los anticuerpos de M puede tener valor a la prueba serológica SARS-CoV-2.

Varias complicaciones en la prueba del anticuerpo se presentan del uso disperso de la proteína de S como el inmunógeno usado en vacunas. Esto subraya la utilidad de la proteína de M.

Previamente, las vacunaciones que combinaban S y N como inmunógenos también se han propuesto, como que reducirían la necesidad las pruebas del anticuerpo de N y de S. Este otros puntos culminantes el papel potencial importante de M como marcador serológico.

Para probar esto, los científicos determinaron los casos clasificados como negativa COVID-19 (debido a la falta de anticuerpos perceptibles de N) pero fueron reclasificados como positivo a través de la investigación para los anticuerpos de M por AHCIM.

Opinaron que eso la complementación de ELISA con AHCIM podría aumentar la sensibilidad y la especificidad de la prueba serológica SARS-CoV2. Además, los marcadores serológicos de larga duración habilitan el serosurveillance óptimo COVID-19. El análisis preliminar de las índices de N y de M IgG (trazadas contra prueba de la polimerización en cadena del poste de los días) mostró una tendencia de disminución en N en un cierto plazo, pero no para el M.

Investigación futura

Mientras que los resultados preliminares son encouraging, más investigación sobre los títulos del anticuerpo de N y de M se requiere establecer M como marcador serológico de larga duración comparado al N.

Otras preguntas importantes se relacionan con las correlaciones entre la presencia de anticuerpos de M y los resultados de la enfermedad y si los anticuerpos contra M alientan la actividad de neutralización de las inmunorespuestas humorales generadas contra SARS-CoV-2.

La dirección de estas preguntas de la investigación podría ayudar inmenso en el revelado vaccíneo y la guía que los antígenos se podrían utilizar como marcadores de la infección anterior en métodos diagnósticos.

Advertencia *Important

el medRxiv publica los partes científicos preliminares que par-no se revisan y, por lo tanto, no se deben mirar como concluyentes, conduce práctica clínica/comportamiento relativo a la salud, o tratado como información establecida.

Journal reference:
Dr. Priyom Bose

Written by

Dr. Priyom Bose

Priyom holds a Ph.D. in Plant Biology and Biotechnology from the University of Madras, India. She is an active researcher and an experienced science writer. Priyom has also co-authored several original research articles that have been published in reputed peer-reviewed journals. She is also an avid reader and an amateur photographer.

Citations

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